В 1597–1598 гг. Константин Константинович Острожский отобрал у Луцкой кафедры «подострожские» имения и владычный двор в окольном Острожском замке – вклады князей Острожских, которые были поданы православной кафедре, а не униатской. Попытки Луцкого епископа Кирилла (Терлецкого) вернуть владения через суд успеха не имели. Всё это побудило Луцких епископов изготовить фальсификат о том, что эти владения дал кафедре якобы сын великого князя Литовского Гедимина Любарт. В конце XVI в. в острожской типографии был издан ряд антиуниатских сочинений: «Ектесис...» (изложение событий, происходивших на Брестском соборе с православной точки зрения), «Апокрисис...» (полемический отклик на книгу Петра Скарги о Брестском соборе, вышедший двумя изданиями), «Книжица в десяти разделах» (сборник посланий Александрийского патриарха Мелетия Пигаса, Иоанна (Вишенского) и Константина Константиновича Острожского). В 1602 г. в Дерманском монастыре в соответствии с пожеланием Милетия Пигаса были созданы училище во главе с Исаакием (Борисковичем) и типография, где в 1605 г. напечатали переведённое Иовом (Борецким) послание Мелетия Пигаса Ипатию Потею. Константин Константинович Острожский прилагал усилия для издания полемического сочинения патриарха Мелетия «Диалог, альбо Розмова, о православной и справедливой вере» (был сделан перевод, сохранившийся в ряде списков). В полемической деятельности (как и раньше) проявилось стремление Константина Константиновича Острожского обращаться к содействию протестантов. И «Ектесис...», и польское издание «Апокрисиса...» были напечатаны в типографии социниан в Кракове, «Апокрисис...» по заказу Константина Константиновича Острожского написал известный политик-протестант Мартин Броневский. На рубеже XVI и XVII вв. протестанты оставались важными союзниками православных в борьбе за религиозные свободы. Их политическое сотрудничество укрепил съезд в Вильно в июне 1599 г. Константин Константинович Острожский стремился начать переговоры по вопросу вероисповедного союза православных с протестантами, однако негативное мнение по этому вопросу Мелетия Пигаса, выраженное им в письмах, привезённых в Речь Посполиту Кириллом I Лукарисом (1600 г.), заставило киевского воеводу отказаться от планов такого союза. В последующие годы Константин Константинович Острожский сыграл важную роль в сохранении в руках православных Киево-Печерского монастыря. Уже в 1590 гг. было предпринято несколько попыток сместить с поста настоятеля архимандрита Никифора (Тура) и передать монастырь стороннику унии митрополиту Михаилу (Рагозе). Константин Константинович Острожский как киевский воевода не оказал никакой поддержки действиям королевских представителей, пытавшихся это осуществить. После смерти архимандрита Никифора (1599 г.) униатский Киевский митрополит Ипатий Потей попытался овладеть монастырём, его поддерживали католические магнаты (в частности, литовский канцлер Лев Сапега). Константин Константинович Острожский вместе с православной шляхтой украинских земель ходатайствовал перед Сигизмундом III о подтверждении жалованной грамоты короля Сигизмунда I Киево-Печерскому монастырю 1522 г. об избрании печерского архимандрита насельниками монастыря и киевской шляхтой.