Только старейшина чешских братьев Теофил Турновский полагал, что слияние с православными возможно на условиях протестантской стороны, которая, впрочем, не была единой. Теофил Торуньский синод положил начало сотрудничеству между протестантами (главным образом, кальвинистами и чешскими братьями) и православными в общественной жизни: на сейме, на сеймиках, в судах, особенно в важнейшем шляхетском суде в Литве – Литовском трибунале, который позднее разбирал многочисленные конфликты между православными и униатами в Великом княжестве Литовском. Это сотрудничество координировалось влиятельными магнатами: с протестантской стороны, главным образом, брестско-куявским воеводой Анджеем Лещинским, а потом его сыном Рафалом, воеводой равским, принадлежавшими к чешским братьям, и виленским воеводой, зятем князя К.К. Острожского кальвинистом Кшиштофом Радзивиллом «Перуном» (затем его сыновьями Янушем и Кшиштофом), а с православной стороны – Константином Константиновичем Острожским и его сыном Александром. В октябре 1596 г. в Бресте состоялся Собор, на котором большинство православных архиереев Западнорусской митрополии во главе с Киевским митрополитом провозгласили унию с католической церковью. Послы Константина Константиновича Острожского и волынской шляхты добивались, чтобы в работе Собора принял участие протосинкелл Никифор, чтобы на Соборе могли присутствовать все желающие и, если стороны не договорятся, они могли бы обратиться к сейму. Когда Сигизмунд III не принял этих условий, было решено созвать отдельный Собор противников унии. Он прошёл одновременно с унийным Собором также в Бресте под защитой войск князя К.К. Острожского. В Соборе участвовали не только Константин Константинович Острожский и представители восточных патриархов, но и большое число православного духовенства (два епископа, десять архимандритов, священники) и православной шляхты. 9 октября протосинкелл Никифор объявил о низложении архиереев-униатов. Во время Собора состоялась встреча Петра Скарги с Константином Константиновичем Острожским, на которой иезуит безуспешно убеждал князя принять унию. Впоследствии князь К.К. Острожский оставался наиболее значительной фигурой антиуниатского лагеря. Константин Константинович Острожский должен был заботиться о православной церкви в Польско-Литовском государстве: её существование в результате Брестской унии оказалось под угрозой, поскольку власть считала униатскую церковь единственной преемницей древнерусской церкви. В 1597 г. в Луцке состоялся сеймик волынской шляхты, на котором присутствовал Константин Константинович Острожский, и где были приняты требования, чтобы униатские архиереи были смещены с кафедр, а на их место избраны православные. Затем в том же году на сейме, где присутствовал Константин Константинович Острожский, те же требования выдвинули православные послы при поддержке протестантов. На сейм Константин Константинович Острожский был вынужден доставить протосинкелла Никифора, который был обвинён в шпионаже, заключён в тюрьму в Мальборке, где и умер. В этой связи Константин Константинович Острожский резко порицал перед Сигизмундом III его политику, которая приведёт к гибели Речи Посполитой.