Значение Константина Константиновича Острожского признавали католики. Пётр Скарга посвятил православному магнату книгу «О единстве Церкви Божьей под одним пастырем и о греческом от этого единства отступничестве» (1577 г.). Она должна была склонить князя к работе над унией православной и католической церквей. Полемический ответ на книгу Константин Константинович Острожский поручил составить социнианину Мотовило, ответ был написан и отослан, в частности, князю Андрею Михайловичу Курбскому, который обнаружил в нём еретические утверждения. Хотя Константин Константинович Острожский отверг основные тезисы Петра Скарги, ему была близка идея церковного единства, особенно перед лицом всё более ощутимой в Европе турецкой угрозы. В начале 1580 гг. князь начал переговоры с представителями папы Римского Григория XIII папским нунцием в Речи Посполитой Альберто Болоньетти и иезуитом Антонио Поссевино. Эти контакты, особенно интенсивные в 1583–1584 гг., касались разных вопросов. Константин Константинович Острожский рассчитывал тогда, что ему удастся привлечь в Острожскую академию учёных греков из Рима (магнат отправил в Рим экземпляр Острожской Библии и выразил готовность прислать для консультаций о характере славянского шрифта своего печатника – Ивана Фёдорова). Константин Константинович Острожский также просил помощи (в том числе в письмах к папе Григорию XIII) в возврате ему имения в Чехии. Сам же предлагал посредничество в контактах с патриархом Иеремией II, обещая убедить его принять григорианский календарь. Эта попытка не удалась, и Константин Константинович Острожский в последующие годы стал противником григорианской реформы. Самой важной темой переговоров Константина Константиновича Острожского с посланниками папы Римского был вопрос об унии. Альберто Болоньетти и Антонио Поссевино считали, что удастся склонить киевского воеводу к унии с Римом, т.е. он признает власть папы при сохранении греческого обряда. Посланцы папы предложили создать в Речи Посполитой патриархат с центром в Киеве или Остроге, глава которого должен был подчиняться папе. Константин Константинович Острожский сообщил об этом проекте патриарху Иеремии II, он не поддержал проект, вследствие чего от него отказался и князь К.К. Острожский. Как показали дальнейшие события, Константин Константинович Острожский готов был содействовать сближению церквей, но негативно относился к возможности личной унии. Контакты с католиками прекратились во второй половине 1584 г., как полагают исследователи, в связи с конфликтами во Львове – принуждением православных совершать богослужение по григорианскому календарю; эти события привели к длительному противостоянию Константина Константиновича Острожского и католического Львовского архиепископа Яна Дмитрия Соликовского. По мнению исследователей, одной из причин разрыва стал факт обращения в католицизм Константина, сына Константина Константиновича Острожского. Отец узнал об этом несколько месяцев спустя и, вероятно, почувствовал себя обманутым. В конце 1580 гг. были написаны антилатинские произведения, в частности, критикующие реформу календаря: как полагают исследователи, сочинение «Ключ Царства Небесного» Герасима Даниловича Смотрицкого было издано в 1587 г. в Вильно; в 1588 г. Василий Суражский написал и издал в острожской типографии сочинение «Книжица о единой истинной православной вере».