Окончательное установление канона Нового Завета затянулось из-за огромного региона распространения христианства и слабой связи между отдельными церквами (вследствие низкого уровня развития средств транспорта и связи) намного дольше, чем это произошло с Ветхим Заветом. Но уже первые отцы церкви («апостольские отцы», как Игнатий и Поликарп; начало в.) знали, что существует различие между их посланиями и посланиями апостолов. Игнатий в одном из своих посланий пишет: «Я не хочу давать никаких повелений подобно Петру и Павлу. Они были апостолами». В посланиях Псевдо-Варнавы и втором Клемента Евангелие от Матфея цитируется как Священное Писание. Юстиний Мартирос (Мученик; около150 г.) сообщает, что на собраниях верующих читаются «памятние писания, называемые евангелиями» и «писания пророков», но исследователи ещё не знают, о каких евангелиях и апостольских книгах идёт речь. Большую ясность вносит Прений (около 180 г.), который был одним из учеников Поликарпа, ученика Иоанна, и стал впоследствии епископом Лионским. Из его писем исследователи сделали вывод, что в качестве канонических принимались четыре Евангелия, книга Деяний Апостолов, письма апостола Павла (включая Послание Филимону), первое послание Петра, первое и второе Иоанна и Откровение; Послания же Иакова и Евреям в канон в то время ещё не входили. Исследователи находят примечательным, что идея о единстве четырёх Евангелий, очевидно, была к тому времени принята и канонизирована уже во всём христианском мире. Тертуллиан (около 200 г.) был знаком с четырьмя Евангелиями, «Деяниями святых апостолов», 13 Посланиями апостола Павла, первым Посланием Петра и первым Посланием Иоанна, а также с Посланием Иуды и «Откровением Иоанна Богослова». Исследователям интересен также канон Муратория, римский список новозаветных книг (конец II в., назван по имени торговца антиквариатом, нашедшего его в 1740 г.). Он, очевидно, является ортодоксальным протестом против вышеназванного «канона» Маркония и содержит четвероевангелие, «Деяния святых апостолов», 13 Посланий апостола Павла, два – Иоанна и «Откровение Иоанна Богослова». В этом списке «Откровение Петра» признаётся не полностью, а «пастырь» Ермы  отвергается как неканонический. Примечательно, по мнению исследователей, что в этом списке, кроме прочего, отсутствуют Послания к Евреям и первое Послание Петра. Однако исследователи считают, что манускрипт не полон (отсюда и название «Фрагмент Муратория»), и, таким образом, эти книги вполне могли быть указаны в нём. Слабые контакты между Востоком и Западом отчётливо видны в ранних античных переводах. Западный (старо-латинский) перевод не содержит некоторые книги, получившие широкое распространение на Востоке (Послание к Евреям, Иакова и первое Послание Петра), в то время как в восточном (старо-сирийском) переводе отсутствуют некоторые книги, известные, прежде всего, на Западе (второе – третье Послания Иоанна, Послание Иуды, «Откровение Иоанна Богослова»). Потребовалось определённое время, пока эти недостающие книги стали известны повсюду, но, взятые вместе, эти две старейшие Библии содержат все канонические книги (за исключением второго послания Петра). Первый полный список всего канона есть между Римом и Сирией. Ориген (около 230 г.) издал в Египте полный список канона, принятый всеми христианами, причём, по его словам, Послания к Евреям, второе послание Петра, второе и третье Иоанна, Иакова и Иуды некоторыми ставились под вопрос.