На крайней было изображено создание Адама и покорение ему во власть всех животных. На следующей иконе – сотворение Евы из ребра спящего Адама, искушение первых людей змием и изгнание их из рая. Третья икона была посвящена жертвоприношению Авраама. На четвёртой пророк Елисей наказывал порочных мальчиков, непочтительных к старчеству и святости пророка. Сюжет пятой иконы – пророк Елисей, стоящий среди поля, покрытого человеческими костями и скорбящий об иудейском народе, погибающем в Вавилонском плену. Завершала нижний ярус икона с изображением пророка Ионы, три дня и три ночи пробывшего во чреве кита в море и чудом изверженного живым. Середину второго яруса занимали царские врата с изображением Благовещения Пресвятой Богородицы, окружённым изображениями четырёх евангелистов. По правую сторону царских врат находилось изображение Христа-Вседержителя, за ним следовали икона Успения Пресвятой Богородицы и икона Ветхозаветной Троицы (три ангела, явившиеся Аврааму у Мамврийского дуба). По левую сторону царских врат была икона Божьей Матери, за ней – иконы Крещения Господня (Богоявления) и Собора святых Архангелов и Ангелов, Херувимов и Серафимов, и прочих Бесплотных Сил. На южной двери алтаря – изображение ветхозаветного царя и первосвященника Мельхиседека, на северной – архидиакона Стефана (по данным московского искусствоведа С.П. Утва, изучавшей иконостас Успенского собора в 1970–1980 гг., на южной двери алтаря был изображён первый еврейский первосвященник Аарон). Над царскими вратами располагалась ещё одна икона Успения Пресвятой Богородицы. Она опускалась вниз во время Успенского поста, когда перед ней служили акафист. Помещение этой иконы над царскими вратами и устройство спуска было подражанием первому на Руси храму, устроенному во имя Успения Богородицы, находящемуся в Киево-Печерской лавре. Иконы третьего и четвёртого ярусов иконостаса представляли важнейшие православные праздники: Рождество Богородицы, Введение Богородицы во храм, Благовещение, Рождество Христово, Сретение Господне, Богоявление, Преображение Господне, Воскресение Лазаря, Вход в Иерусалим, Вознесение, Сошествие Святого Духа на апостолов, Успение Пресвятой Богородицы, Воздвижение Креста Господня, Покров Пресвятой Богородицы (по данным С.П. Утва, в праздничном чине имелись ещё две иконы – «Гостеприимство Авраама» и «Обрезание Господне»). На иконах пятого яруса были изображены апостолы и евангелисты. В центре яруса находился Деисус: композиция, включающая изображение Иисуса Христа – Царя Славы, сидящего на престоле, по сторонам его – изображения Иоанна Предтечи и Пресвятой Богородицы. В шестом ярусе находились иконы ветхозаветных пророков. В центре яруса – икона Богородицы с Предвечным Младенцем, а по сторонам от неё – преподобные Антоний и Феодосий Печерские (первый на Руси храм Успения Пресвятой Богородицы был создан в Киеве по благословению, принесённому преподобным Антонием с Афонской горы). Седьмой ряд иконостаса – страстной. В его центре размещался Крест с изображением на нём распятого Спасителя и с предстоящими Богородицей и Иоанном Богословом. На иконах седьмого яруса были изображены события Седмицы страданий Христовых (сейчас иконы тульского Успенского собора хранятся в Тульском музее изобразительных искусств).