Окончательно недовольство сошло на нет после того, как королю удалось привлечь на свою сторону некоторых из недовольных сеньоров, и после того, как в 1462 г.  стало известно о беременности королевы. Однако этот триумф Энрике IV оказался весьма кратким, т.к. уже в сентябре Карл внезапно умер, вероятно, от отравления. Сразу же после рождения Хуаны Бельтранехи (1462–1530 гг.), первой и единственной дочери Энрике IV, она была объявлена наследницей престола, и ей был присвоен титул принцессы Астурийской. Одновременно с этим возник слух, что новорождённая на самом деле является дочерью всем известного любовника королевы Жуаны Португальской и фаворита короля – Бельтрана де ла Куэва, графа де Ледесма, в связи с чем Хуана получила своё прозвище, под которым вошла в историю. Тем не менее, кортесы объявили наследницей престола Хуану, а её права признали сводные брат и сестра Энрике IV – Изабелла и Альфонсо. С этим решением короля были согласны не все – некоторые магнаты считали верными слухи о незаконном происхождении Хуаны, другие желали устранения Бельтрана. Вскоре недовольство влиятельного Толедского архиепископа вызвал брак между Куэва и дочерью маркиза Сантильяна, племянницей кардинала Педро Гонсалеса де Мендоса. Оппозиция при дворе, вдохновляемая разочарованным неприсвоением ему звания магистра Ордена Сантьяго Хуаном Пачеко, находящимся в связи с этим в конфликте с обладателем этого звания графом де Ледесма, добивалась признания наследником Альфонсо. Заговорщики строили планы арестовать короля и королеву, провозгласить королём юного принца и править от его имени. Под давлением знати король в 1464 г. согласился передать магистерство Ордена Сантьяго Альфонсу, который должен был при этом находиться под защитой маркиза Вильена. При этом инфант должен был обещать жениться на Бельтранехе, за что получал титул принца Астурийского и становился наследником престола. В следующем году в Авиле собрались заговорщики, которые объявили Альфонсо королём, а Энрике IV низложенным. Оскорбительные по отношению к королю действия, которыми сопровождалась церемония в Авиле, привели к тому, что на сторону короля стали многие города. Начавшиеся вслед за этим волнения закончились в июле 1468 г. с внезапной, внушающей подозрения в отравлении смертью Альфонсо, поскольку Изабелла отказалась поддержать дело мятежников. Спустя два месяца был заключён договор у Быков Гисандо, регулирующий вопросы престолонаследия. Согласно ему, наследницей Энрике IV с титулом принцессы Астурийской объявлялась Изабелла в обмен на обязательство заключить брак только с согласия короля, который, однако, не мог заставить Изабеллу выйти замуж против её воли. Протесты королевы, требовавшей сохранения прав своей дочери, оказались не услышанными. Со смертью Альфонсо роль Изабеллы в Кастилии, в которой не действовал (в отличие от Арагона) салический закон, существенно изменилась. Она унаследовала состояние брата и его права на кастильский трон. В 1469 г. Изабелла находилась в Оканье, в ожидании согласия на её брак либо с герцогом Беррийским, братом короля Франции, либо с королём Португалии. Оба кандидата отвечали требованиям Энрике IV к потенциальному мужу Изабеллы, поскольку первый находился слишком далеко, а второй был слишком стар, чтобы можно было ожидать потомства от этого брака.