Львовские мещане горячо поддерживали идею распространения образования и просвещения как средства сохранения православия и национальной самобытности. Автор предисловия к сборнику «О воспитании чад», вышедшему в типографии братства в 1609 г., считал распространение образования и знаний главной предпосылкой развития и процветания «всего народу руського», в то время как невнимание к школьному образованию, по его мнению, неизбежно приведёт общество к упадку. Образцом просветительской деятельности для львовских братчиков являлся Острожский просветительский центр, включавший школу и типографию. Во Львове православные училища существовали до появления братской школы. Первое упоминание о «руской школе» исследователи встречают во львовских гродских актах за 1546 г. О желании львовских мещан организовать школу впервые говорится в грамоте Антиохийского патриарха Иоакима от 15 января 1586 г.: «Хотят с помочю Божею панове мещане львовские школу закладати для наученя детем християнским вшелякого стану, которые бы мели учитися Письма Светого грецкого и словенского, да не будет род их християнский аки безсловесен, ненаучения ради. И теж купили друкарню письма словенского и греческого, ку той же школе потребную». В грамоте Киевского митрополита Михаила (Рагозы) на учреждение школы при Львовском Успенском братстве говорится: «Не быти другому училищу общему в месте Львове, кроме единого училища братского Успения Пречистыя Богородица, и во оном только самом учити детей благочестивых и православных християн Божественнаго и Священнаго Писания, словенскаго же и елинскаго языков». Возглавил школу грек архиепископ святой Арсений Элассонский, преподававший здесь в 1586–1588 гг. греческий язык. Он разработал программу обучения. Учителем «словенского» языка в 1586–1593 гг. являлся Стефан Зизаний (см. в ст. Зизании). В 1604 г. братство приняло на должность ректора школы Ивана Матвеевича Борецкого (впоследствии митрополит Киевский Иов). Кроме заведования школой И.М. Борецкий должен был учить детей греческому и латинскому языкам, ему было положено жалованье 10 злотых в квартал. Учителем «языка словенского» был принят Фёдор Сидорович с жалованьем 5 злотых в квартал. В 1611 г. братство купило у И. Красовского, долгое время бывшего старейшиной братства, «Мисцовскую» каменицу «на школу вечне» и для типографии. Львовская братская школа в отличие от большинства школ того времени была общедоступной. В школьном уставе было оговорено, что она создаётся для «всех православных христиан, як стану духовного, так же особ княжецких, панских, шляхетских и всего посполитого народу, даже и до убогих вдовиц» (Центральный государственный исторический архив в Ленинграде). Дети из бедных семей и сироты обучались в школе бесплатно и находились на иждивении братства. Плата за обучение была незначительной и вносилась родителями раз в квартал «с поможення своего» (по возможности). В 1588 г. размер платы колебался от 6 до 12 грошей.