Перед его созывом в Киев приехал королевский представитель Адам Григорьевич Кисель, который беседовал с Иовом и Петром (Могилой). Иов заверил А.Г. Киселя, что готов провести Собор. Митрополит и киево-печерский архимандрит сообщили, что осуждают ошибочные мнения Лаврентия Зизания (высказанные им в ходе полемики и в некоторых сочинениях), и что напрасно протоиерей Андрей Мужиловский защищал их в спорах с Мелетием (Смотрицким). Иов и архимандрит Пётр, как и в 1623 г., проявили готовность обсуждать догматические расхождения между православием и католичеством (так, например, они говорили, что не осуждают служение на опресноках, но отвергают учение о чистилище), но отказались разорвать отношения с Константинопольским патриархом и подчиниться папе. За десять дней до Собора приехавшие в Киев представители православной шляхты встречались в братской церкви с Иовом и выразили резкое недовольство его действиями. Ему указывали, что в королевском универсале целью Собора объявлено заключение унии, в таких условиях Иов не должен был созывать Собор. Митрополита порицали и за встречи с королевским представителем. 5 июля шляхтичи внесли в киевские гродские книги протест против созыва Соборов и заранее объявили недействительными решения, которые будут приняты в ущерб православной вере и её правам. Проявило свою обеспокоенность положением дел в письме к Иову от 25 июня Запорожское войско, приславшее в Киев своих представителей следить за тем, «яко бы противник помехи не одержал». К открытию Собора в Киев собралось более 500 духовных лиц, первые заседания проходили в присутствии большого числа казаков, угрожавших, что Иова и Петра (Могилу) постигнет участь киевского войта Ходыки. Духовные лица собрались затем отдельно от казаков в Никольском монастыре, но и здесь большая часть участников выступила против отправки послов на Львовский собор. Послы православных на сейме должны были заявить о согласии на созыв Собора, чтобы уладить с униатами споры о церковном имуществе, а не обсуждать вопросы веры, которые могут рассматриваться лишь с участием восточных патриархов. В 1630 г. наметился новый этап в деятельности Иова, связанный с укреплением его связей с войском Запорожским и осложнением отношений с властями Речи Посполитой. Накануне казацкого восстания 1630 г. митрополит предупреждал войско о враждебных планах властей и призывал стоять за веру. Старший сын митрополита Стефан погиб в битве с поляками под Переяславом.