В 1923 г. Владимирский Княгинин монастырь был закрыт, сёстры выселены, игуменья Олимпиада (Медведева) несколько раз подвергалась арестам и ссылкам, поддерживала связь с находившимся в заключении и ссылках Ковровским епископом Афанасием (Сахаровым). В переданном Владимирскому музею монастырском Успенском соборе был устроен склад, с 1931 г. – зернохранилище. После осмотра в 1924 г. собора Петром Дмитриевичем Барановским началась реконструкция здания, в 1950–1960 гг. храм был восстановлен в формах XVI в., реставрационные работы проводились под руководством Александра Васильевича и Игоря Александровича Столетовых; в 1967–1983 гг. группа реставраторов под руководством Алексея Ивановича Некрасова раскрыла росписи XVII в. В 1945 г. в храме разместилась Владимирская реставрационная мастерская, с 1958 г. Успенский собор принадлежал Владимиро-Суздальскому музею, в 1985 г. в соборе открылась экспозиция музея. В Казанской церкви в 1928–1997 гг. располагалось хранилище документов архива Владимирской области. Бывшие монастырские кельи стали собственностью жилищно-арендного кооперативного товарищества. По инициативе товарищества было уничтожено монастырское кладбище, на территории которого появилась спортивная площадка. В 1928 г. была снесена бо́льшая часть ограды, в 1932 г. – колокольня. 22 марта 1993 г. Успенский собор Владимирского Княгинина монастыря был передан церкви. Определением Священного Синода 11 июня 1993 г. монастырь был возрождён, настоятельницей утверждена монахиня александровского в честь Успения Божьей Матери женского монастыря Антония (Шаховцева), возведённая в 1995 г. в сан игуменьи. В 1997–1999 гг. в Успенском соборе был установлен новый резной 2-ярусный иконостас, в местном ряду находится икона Успения Божьей Матери (XVII в., вклад патриарха Иосифа), переданная монастырю на хранение Владимиро-Суздальским музеем. Воссозданы повреждённые и уничтоженные росписи нижнего яруса собора. В соборе пребывает Боголюбская икона Божьей Матери, перенесённая весной 1992 г. из Владимиро-Суздальского музея. В 1993 г. крестным ходом из кафедрального Успенского собора во Владимирский Княгинин монастырь был перенесён ковчежец с частицей мощей Авраамия Болгарского. Из собора в монастырь поступила вышитая золотом икона Авраамия Болгарского конца XIX в. работы монастырских мастериц, по преданию принадлежавшая игуменье Олимпиаде. По благословению Владимирского епископа Евлогия (Смирнова) насельницы монастыря составили тропарь и кондак благоверным княгиням, чьи останки почивают в обители. Казанский храм был возвращён монастырю в октябре 1998 г. 10 сентября 1995 г. Владимирский Княгинин монастырь посетил Патриарх Московский и всея Руси Алексий II. В 1998 г. в монастырь была принесена написанная на Афоне икона великомученика Пантелеимона. С 1997 г. при обители существуют епархиальная регентская школа с 3-годичным обучением (40 учениц), православный приют. Открыты Никольский скит в селе Новом Юрьев-Польского района и подворье в селе Арбузове Собинского района. В декабре 2004 г. во Владимирском Княгинином монастыре жили около 25 насельниц.