С помощью друга кавалера Марино Пуссен стал вхож во дворы папского племянника, кардинала Барберини (1597–1679 гг.) и папского советника Марчелло Саккетти. В этот период он выполняет рисунки и полотна на мифологические темы. В Риме кавалер Марино внушил Пуссену любовь к изучению итальянских поэтов, произведения которых дали художнику обильный материал для его композиций. Он испытал влияние Аннибале Карраччи (1560–1609 гг.), Доменикино (1581–1641 гг.), Рафаэля Санти, Тициана Вечеллио (1488/1490 – 1576 гг.), Микеланджело Буонарроти (1475–1564 гг.), изучал трактаты Леонардо да Винчи и Альбрехта Дюрера (1471–1528 гг.), зарисовывал и обмерял античные статуи, занимался анатомией и математикой, что нашло отражение в живописных произведениях, преимущественно на темы античной древности и мифологии, что дало непревзойдённые образцы геометрически точной композиции и продуманного соотношения цветовых групп. В 1625–1626 гг. он получил заказ от кардинала Барберини написать картину «Разрушение Иерусалима» (не сохранилась), но позже написал второй вариант этой картины (1636–1638 гг., Вена, Музей истории искусств). Практически все картины Николя Пуссена – на историко-мифологические сюжеты. Он считается мастером чеканной, ритмичной композиции; одним из первых оценил монументальность локального цвета. В 1627 г. Николя Пуссен написал картину «Смерть Германика» (Рим, Палаццо Барберини) по сюжету древнеримского историка Тацита, которая считается программным произведением классицизма. В ней показано прощание легионеров с умирающим полководцем. Гибель героя воспринимается как трагедия общественного значения. Тема интерпретирована в духе спокойной и суровой героики античного повествования. Идея картины – служение долгу. Художник расположил фигуры и предметы в неглубоком пространстве, расчленив его на ряд планов. В этом произведении выявились основные черты классицизма: ясность действия, архитектоничность, стройность композиции, противопоставление группировок. Идеал красоты в глазах Пуссена состоял в соразмерности частей целого, во внешней упорядоченности, гармонии, ясности композиции, что станет характерными чертами зрелого стиля мастера. Одной из особенностей творческого метода Николя Пуссена был рационализм, сказывавшийся не только в сюжетах, но и в продуманности композиции. В это время он создаёт станковые картины, главным образом, среднего размера, но высокого гражданственного звучания, заложившие основы классицизма в европейской живописи, поэтические композиции на литературные и мифологические темы, отмеченные возвышенным строем образов, эмоциональностью интенсивного, мягко сгармонизированного колорита – «Вдохновение поэта», (Париж, Лувр), «Парнас» (1630–1635 гг.; Прадо, Мадрид). Господствующий в произведениях Пуссена 1630 гг. ясный композиционный ритм воспринимается как отражение разумного начала, придающего величие благородным поступкам человека – «Спасение Моисея» (Лувр, Париж), «Моисей, очищающий воды Мерры», «Мадонна, являющаяся св. Иакову Старшему» («Мадонна на столбе»; 1629 г., Париж, Лувр).