30 марта 1522 г. на Тверскую кафедру был поставлен постриженик Иосифова монастыря Акакий, 2 апреля 1525 г. во епископа Коломенского был хиротонисан племянник Иосифа Вассиан (Топорков), 20 февраля 1536 г. епископом Смоленским стал другой постриженик Иосифова монастыря – Савва (Слепушкин). 16 марта 1539 г. на Смоленской кафедре его сменил также постриженик Волоколамского монастыря Гурий (Черлёного-Заболоцкий), который, по мнению исследователей, был настоятелем Симонова (1526–1528 гг.) и Пешношского (с 1529 г.) монастырей (Александра Александрович Зимин причислял к иосифлянам также Митрофана, хиротонисанного в феврале 1507 г. во епископа Коломенского, Нила Грека, занимавшего Тверскую кафедру в 1509–1521 гг., который 23 января 1508 г. был возведён на Крутицкую кафедру; однако эти иерархи не являлись пострижениками Волоколамского монастыря, исследователи не причисляют их к иосифлянам на том лишь основании, что они не были оппонентами Иосифа и поддерживали его в некоторых вопросах). Об особых симпатиях великого князя Василия III к иосифлянам свидетельствуют его частые поездки в Волоколамский монастырь, выбор в 1530 г. волоцкого старца Кассиана Босого восприемником новорождённого наследника Ивана, а также обстоятельства смерти и похорон великого князя. Именно митрополит Даниил вопреки возражениям бояр настоял на предсмертном пострижении Василия III. Церемонией погребения руководили старцы Волоколамского монастыря: «Начаша его наряжати старцы осифовскые, а великого князя стряпчих отослаша» (Полное собрание русских летописей, том 6). В период регентства Елены Васильевны Глинской (декабрь 1533 г. – 3 апреля 1538 г.) митрополит Даниил активно поддерживал политику правительства. Он привёл к присяге малолетнему Ивану IV и Елене Глинской братьев Василия III и бояр. По благословению митрополита был предпринят поход на Литву (ноябрь 1534 г.), осуществлено строительство Китай-города в Москве. В 1537 г., во время мятежа удельного князя Андрея Ивановича Старицкого, митрополит Даниил поддержал регентшу. После прихода к власти боярской группировки князей Шуйских 2 февраля 1539 г. митрополит Даниил был сведён с престола и до кончины жил в Волоколамском монастыре. Кандидатура на пост митрополита другого выходца из Иосифовой обители игумена Феодосия, настоятеля Варлаамиева Хутынского в честь Преображения Господня монастыря, не была поддержана. Во главе Русской церкви встал постриженик Троице-Сергиева монастыря Иоасаф (Скрипицын). При нём был сведён с Коломенской кафедры Вассиан (Топорков; 1542 г.). Наибольшее влияние иосифляне имели в 1542–1563 гг., когда митрополичью кафедру занимал постриженик Пафнутиева Боровского монастыря Макарий, почитавший Иосифа. Митрополит Макарий одобрил Житие Иосифа и службу ему и включил в Великие Четьи-Минеи сочинения волоцкого игумена: «Книгу на новгородских еретиков» («Просветитель») и духовную грамоту. 18 июня 1542 г. Новгородским архиепископом был поставлен постриженик Волоколамского монастыря Феодосий. В 1540 гг. бывшие насельники обители становились настоятелями важнейших русских монастырей: в 1542 г. Трифон (Ступишин) был назначен игуменом Пешношского монастыря, в 1543 г. Савва (Чёрный) стал архимандритом Симонова монастыря, игумен Иосифова монастыря Нифонт (Кормилицын) в сане архимандрита возглавил Новоспасский монастырь.