К началу XVI в. в Иосифовом Волоколамском монастыре проживали постриженики из числа приближённых Волоцкого князя: дети боярские князь Андрей Андреевич Голенин-Ростовский (в монашестве Парфений), князь Данило (Лупа) Звенигородский (монах Даниил Звенигородский), инок Нил (Полев), А.Н. Квашнин (монах Арсений), Павел Голова, П. Тютчев (монах Павел), Иона Голова (Иона Пушечников) и др. Иосиф свидетельствовал, что в монастыре «почали стричи в черници добрые люди от князей и бояр и от детей боярских». При нём в обители проживали бывшие игумены Саввина Сторожевского монастыря Иоасаф и Каллист. Основатель обители постригал и выходцев из «простой чади», и даже беглых холопов. В период игуменства Иосифа в числе влиятельных старцев упоминаются Гурий, Варлаам, Иннокентий, Каллист Старый, Симеон, Дионисий и Феодосий Звенигородские, Вассиан и Геронтий (Ракитины), Зосима (Ростопчин), Варлаам (Чемесов), Варлаам (Пестрик), Игнатий (Огорельцев), Тихон (Ленков), Нил (Полев), Филофей Державин, Феоктист Крылошенин. В Послании великому князю Василию III Ивановичу (около 1507 г.) среди возможных преемников Иосиф называл десять старцев: «...Пригожи к тому делу старец Касьян, Иона Голова, Арсеней Голенин, Калист бывшей игумен, Гурей бывшей келарь, Горонтей Рокитин, Геласей Сукаленов, Варлам Старой, Селиван келарь, Тихан Ленков». Наибольшим доверием Иосифа пользовались, по мнению исследователей, старцы Кассиан Босой и Иона Голова. Поскольку причиной ухода из Боровского монастыря называлось несогласие братии с намерением Иосифа ввести строгое общежитие, то исследователи полагают, что общежительный устав он ввёл в Иосифовом Волоколамском монастыре уже с основания обители. В Краткой редакции Устава (древнейший список – Российская национальная библиотека) Иосиф изложил основы строгого общежития: равенство монахов, отказ от любой собственности, обязательный труд для всей братии, запрет отлучек из монастыря, разговоров на трапезе и в кельях. Братия носила самую простую одежду, молилась на продолжительных службах в холодной церкви и довольствовалась непритязательной пищей. По благословению игумена некоторые монахи носили под одеждой вериги или панцири, другие принимали обет спать сидя, совершали в день от 1 тыс. до 3 тыс. поклонов. Те, кто не выдерживали установленных порядков, покидали монастырь, жалуясь: «...Жёстко есть сие житие; в нынешнем роде кто может таковаа понести?» Имущество и деньги, которые вкладчики давали в монастырь при пострижении, оставались в общемонастырском владении. В Пространной (Минейной) редакции Устава (Великие Минеи Четьи), включавшей 14 глав, всей братии предписывались единообразная пища и питьё, но правила поста устанавливались в зависимости от сил каждого инока («не всемъ бо вся равна скудости ради тщаниа и изнеможениа силы») в соответствии с принципом «трёх устроений».