Статус епархиальных имели братства Софийское в Гродно (учреждено в 1882 г., имело попечение о церковно-школьном деле), слонимское Преображенское (создано в 1560 г., восстановлено в 1866 г.), брестское Свято-Николаевское (создано в 1591 г., восстановлено в 1867 г.), красностокское во имя Пресвятой Богородицы (учреждено 1903 г.). Почти при каждом храме существовали приходские братства, из которых наиболее деятельным было Петропавловское в Волковыске (1866–1870, 1873–1915 гг.), ставившее задачей заботу о православных храмах Волковыска, устроение часовен на месте уничтоженных православных церквей, распространение в городе образования в духе православия. В 1901–1915 гг. издавались еженедельные «Гродненские епархиальные ведомости». 9 декабря 1904 г. был создан Гродненский церковно-археологический комитет и музей для изучения, охраны и популяризации церковных древностей. В 1906 г. состоялось освящение отреставрированной Борисоглебской (Коложской) церкви. В 1907 г. завершилось строительство храма в честь Покрова Пресвятой Богородицы (современный кафедральный собор) для войск Гродненского гарнизона. 18 мая 1907 г. указом Святейшего Синода учреждено Белостокское викариатство Гродненской епархии. Во время Первой мировой войны большинство священнослужителей и православного населения Гродненской губернии было эвакуировано вглубь России. В феврале 1915 г. в Москву выехал архиепископ Михаил (Ермаков) вместе с братией гродненского Борисоглебского монастыря. В сентябре 1918 г. в Гродно прибыл Белостокский епископ Владимир (Тихоницкий) и в отсутствие правящего архиерея по благословению патриарха Тихона (Белавина) вступил в управление Гродненской епархией. По Рижскому договору 1921 г. территория Гродненской епархии оказалась в составе Польши. Согласно переписи того же года, на территории епархии жило более 484 тыс. православных, действовало около 250 церквей, объединённых в 20 благочиннических округов, и два монастыря (жировицкий Успенский и гродненский Рождества Пресвятой Богородицы). В 1923 г. к Гродненской епархии был присоединён Новогрудский повят, её территория включала помимо данного региона Августовский, Белостокский, Бельский, Гродненский, Сувалкский, Сокульский и Волковысский повяты Белостокского воеводства и Слонимский повят Новогрудского воеводства. В 1928 г. к Гродненской епархии были присоединены приходы Барановичского и Несвижского повятов. В условиях преследования православного населения со стороны польских властей и мер, принимаемых правительством Юзефа Пилсудского для отделения польских православных епархий от Русской церкви, архиепископ Владимир отстаивал необходимость сохранения канонического единства с РПЦ. 13–14 июля 1922 г. этот вопрос обсуждался на Гродненском епархиальном съезде представителей духовенства, была принята резолюция, выражавшая протест против навязываемой автокефалии. Несмотря на протесты, в 1925 г. польское правительство добилось от Константинопольского патриарха издания акта о даровании автокефалии Польской православной церкви, частью которой стала Гродненская епархия. Священноначалие РПЦ не признало канонической законности этого акта.