Со времени возобновления в Красностоке православного прихода (1866 г.) чудотворная икона находилась в местной церкви, а с 1901 г. стала главной святыней перенесённой из Гродно женской обители. 7–8 сентября 1901 г. крестным ходом, в котором участвовало до 20 тыс. человек, икона была перенесена в Гродненский монастырь. Здания в Красностоке были капитально отремонтированы и приспособлены для нужд православных. В 1901 г. под руководством игуменьи Елены (Коноваловой; 1912–1923 гг.) при монастыре была открыта двухлетняя школа для девушек; в 1903 г. – церковное братство, объединившее представителей духовенства и мирян с целью диаконической и социальной деятельности; в 1907 г. – трёхгодичная учительская семинария (Алексеевская школа) для подготовки учителей церковноприходских школ Литовской, Минской, Варшавской, Волынской и Гродненской епархий. При Гродненском монастыре действовали приют для сирот и девушек из бедных семей, сельскохозяйственная школа, аптека, амбулатория, госпиталь, ткацкая, золотошвейная, иконописная и другие мастерские. Сёстры опекали семь окрестных школ. Благодаря хозяйственной деятельности монастырь мог содержать 250 насельниц, до 600 детей. За десять лет пребывания в Красностоке количество сестёр возросло с 30 до 200. С началом Первой мировой войны насельницы, проживавшие в Красностоке и Гродно, клир красностокского прихода вместе с чудотворными иконами (Красностокской (оригиналом и копией) и Владимирской) эвакуировались сначала в Москву, а с 1918 г. во главе с игуменьей Еленой размещались в Екатерины великомученицы монастыре в Подмосковье. В 1920–1930 гг. священнослужители были репрессированы и приняли мученическую кончину. Сёстры пребывали в Екатерининской обители на условиях трудовой артели до 1931 г., после чего около ста человек вернулись в Гродно (в красностокских строениях к тому времени разместился монастырь католического ордена салезиан), остальные рассеялись по окрестным селениям. Игуменья Елена скончалась в 1937 г. в Малоярославце. Постройки монастыря в Гродно были повреждены во время Первой мировой войны, в результате прямого попадания снаряда пострадала церковь в честь Рождества Пресвятой Богородицы. В 1921 г. в Гродно вернулась Владимирская икона Божьей Матери. В 1923–1929 гг. стараниями игуменьи Онуфрии (Арцукевич; 1923–1931 и 1948–1953 гг.) собор Гродненского монастыря был восстановлен. Во время Великой Отечественной войны Гродно был оккупирован немецкими войсками, действующий монастырь возглавляла игуменья Серафима (Фельдман; 1931–1947 гг.). В 1944 г. после освобождения города Красной Армией был незаконно арестован и осуждён на 20 лет исправительно-трудовых лагерей священник монастыря Никита Томчук (реабилитирован в 1992 г.).