Одобренный Синодом устав общины предписывал содержание сестёр на добровольные пожертвования, «без всякого пособия из казны». По благословению епископа Платона настоятельницей стала бывшая насельница одесского во имя архангела Михаила монастыря монахиня Мария (в схиме Мелетия; ум. 13 сентября 1873 г.), благочинным общины – протоиерей И. Деркачёв. По ходатайству Екатеринославского епископа Феодосия 28 января – 14 февраля 1877 г. Тихвинская женская община была обращена в нештатный общежительный монастырь. Определением Синода от 23 апреля 1878 г. настоятельницей Днепропетровского монастыря стала игуменья Олимпиада, в 1911 г. – игуменья Констанция. В храмах Днепропетровского монастыря служили два священника – Фёдор Балабанов и Лазарь Добринский (1911 г.). В начале XX в. в Днепропетровском монастыре проживало около 250 сестёр, в 1917 г. – 287 насельниц, в том числе 49 мантийных монахинь, 98 рясофорных инокинь и 140 послушниц. В декабре 1866 г. монахиня Мария направила епископу Платону прошение о строительстве «на капитал от жертвователей» зимней каменной церкви. В марте 1867 г. епископ Платон выдал храмозданную грамоту, 23 апреля того же года состоялась закладка, 14 января 1868 г. – освящение храма во имя великомученицы Варвары. В 1867 г. был построен деревянный дом для трапезной и кухни, деревянная ограда, в 1868 г. – каменный дом (с 21 кельей), к которому сделаны с восточной и южной сторон две пристройки (1869–1870 гг.), в 1870 г. устроен дом для священнослужителей. В январе 1869 г. монахиня Мария ходатайствовала перед епархиальным начальством о возведении каменного собора в честь Тихвинской иконы Божьей Матери с приделами в честь Вознесения Господня и Казанской иконы Божьей Матери. 11 мая 1869 г. состоялась закладка собора. На средства жены надворного советника Е.Г. Мизко (30 703 руб.) и других благотворителей в 1874 г. собор и колокольня при нём были построены и освящены. Главной святыней Днепропетровского монастыря стал список с Тихвинской иконы Божьей Матери, в 1867 г. принесённый из Тихвина в Екатеринослав и с 1874 г. находившийся за правым клиросом Тихвинского собора обители. 23 апреля 1873 г. при общине было открыто духовное училище с двухгодичным курсом для девочек-сирот, которые содержались за счёт средств общины и благотворителей. Приём детей в училище производился ежегодно с 15 августа по 1 сентября. Ученицы изучали Закон Божий, русский язык, чистописание, арифметику, географию, занимались пением. Ежедневные уроки начинались в 8 часов и кончались в 12 часов. В зимнее, осеннее и отчасти в весеннее время с 14 до 17 часов воспитанницы занимались рукоделием, в остальное время года – огородничеством и садоводством под надзором и руководством казначеи и благочинной.