В XV в. в западноевропейском искусстве получает популярность аллегорическое изображение Благовещения как мистической охоты на единорога. Православная церковь, считая Благовещение соименным Евангелию (по-гречески «благая весть»), размещает икону этого праздника на Царских вратах в окружении четырёх евангелистов. Таким образом, вся символика Царских врат получается связанной с благовествованием: «…Через Благовещение Слово стало той плотью, которую мы можем вкусить в Причастии. А принять участие в этой Вечной Трапезе мы можем лишь потому, что позваны апостолами-благовестниками». Врата являются дополнительным символом Богородицы (образ из ветхозаветного пророчества Иезекииля об обращённых на восток «заключенных» дверях, которыми входит Господь). До появления в православных храмах высоких иконостасов эту сцену, также разделённую надвое, располагали в храме на западных гранях восточных подкупольных столбов, на границе алтаря и основной части храма. Причём изображение Архангела располагается на левой опоре, а Богоматери – на правой. Например, как в киевском соборе Святой Софии (северо-восточный и юго-восточный столбы; самое раннее «Благовещение» в русском искусстве, 1040 гг.). Иногда изображения наносились и в других местах – на триумфальной арке, на стенах и своде. Протоблаговещение и Благовещение обычно представлены в составе клейм икон Акафиста Богоматери. Среди русских икон на этот сюжет исследователи отмечают «Устюжское Благовещение» (Великий Новгород) и иконы Андрея Рублёва (около 1360 – 1428 гг.) и Даниила Чёрного (около 1360 – 1430 гг.), а также фреску Дионисия (около 1440 – после 1502 гг.) в соборе Рождества Богородицы Ферапонтова монастыря. К более позднему времени относятся работы художника Владимира Лукича Боровиковского (1757–1825 гг.). Существует большое количество храмов, посвящённых этому празднику: Благовещенский собор Московского кремля, Благовещенский собор Казанского кремля, Благовещенский собор в Сольвычегодске, церковь Благовещения над киевскими Золотыми воротами (не сохранилась), церковь Благовещения Пресвятой Богородицы в Благовещенском переулке Москвы (не сохранилась), на Якиманке; на Воронцовом Поле; в Ферапонтовом монастыре, церковь Благовещения в Аркажах (Великий Новгород) и т.д. Существовало также несколько православных Благовещенских монастырей. Благовещение стало источником возникновения многочисленных русских топонимов (Благовещенск, Благовещенское и проч.), а также фамилии «Благовещенский». Среди скульптур известны алтарь Кавальканти с рельефом «Благовещение» (Донателло, около 1435 г., для церкви Санта-Кроче); скульптура «Благовещение»  на южном крыле западного фасада собора в Амьене (около 1225 г.); рельеф «Благовещение» (Никколо Пизано, 1260 г.) и др. Среди литературных произведений по мотивам данного сюжета известны эротическая юношеская поэма А.С. Пушкина «Гаврилиада», драматическая поэма Поля Клоделя «Благая весть Марии», романс «Сан-Габриэль (Севилья)» Федерико Гарсиа Лорки из цикла «Цыганское романсеро». По давней традиции на Благовещение в России принято отпускать на волю птиц. Это делается в напоминание о Благой вести и свободе, которые даны не только людям, но и всему Божьему творению. Следуя этому обычаю, ежегодно Московский патриарх с паперти Благовещенского собора выпускает стаю голубей. На эту тему существует стихотворение А.С. Пушкина: «В чужбине свято наблюдаю родной обычай старины…».