Перед произнесением Ааронова благословения когены омывают руки, накрываются особой тканью (талит), чтобы никто не мог видеть их в момент благословения, которое они произносят, стоя лицом к молящимся, подняв ладони на уровень лица и раздвинув пальцы рук определённым образом. Молящиеся после каждой из трёх частей благословения отвечают: «Аминь». Вне синагоги у иудеев принято преподавать Аароново благословение своим детям. В христианскую традицию Аароново благословение вошло, в основном, опосредованно. В византийском обряде Ааронову благословению соответствует главопреклонная молитва, завершающая все службы, которая всегда предваряется преподанием мира («Мир всем»). Большинство восточных литургий также содержат главопреклонную молитву после анафоры. По мнению Роберта Тафта, главопреклонная молитва вошла в чин литургии в IV в., первоначально она служила отпустом тех христиан, кто по тем или иным причинам не причащался. Впоследствии она стала интерпретироваться как молитва перед причащением, что повлияло и на её текст. Троекратному упоминанию имени Божия в Аароновом благословении в Новом Завете соответствует упоминание имён трёх Лиц Святой Троицы в благословении: «Благодать нашего Господа Иисуса Христа, и любовь Бога Отца, и общение Святого Духа со всеми вами» (2 Кор. 13:13), начинающем центральную молитву литургии – анафору. В литургии II книги Апостольских постановлений благословение народа епископом перед анафорой прямо связывается с Аароновым благословением. В современном православном богослужении слова псалма 66:1, являющиеся парафразой Ааронова благословения, возглашаются священником в качестве конечного благословения на полунощнице, на часах первом и девятом (Великим постом – и на третьем, и на шестом), великом повечерии. Буквально текст Ааронова благословения входит в богослужение испано-мосарабского обряда. Исидор Севильский в сочинении «О церковных службах», говоря о благословении предстоятеля, ссылается на Аароново благословение. В некоторые дни оно произносится в качестве обычного благословения перед причащением. Аароново благословение некогда употреблялось и в римском обряде, Сакраментарий папы Геласия I предписывает в некоторые дни читать его текст среди заключительных благословений мессы. В лютеранских церквах Аароново благословение обычно произносят в конце богослужений. Особая роль этого благословения подчёркивается современной западной библейской критикой, которая видит в нём продукт послепленного священнического богословия.