В III в. с Антиохией были объединены близлежащие греческие колонии (Иополь и Паг Боттия), образовав второй квартал города. Третий квартал был построен на речном острове царём Селевком II Каллиником (246–226 гг. до н.э.) и назван Неаполем («новым городом»); четвёртый – основан царём Антиохом IV Епифаном (175–164 гг. до н.э.) на склонах горы Сильпий. Каждый из кварталов имел собственные оборонительные сооружения. Город, делившийся на 18 «демов» (от греч. – народ), обладал муниципальной автономией и управлялся собранием местной знати – декурионов (к 360 г. н.э. их насчитывалось около 200). Население Антиохии, исповедовавшее различные культы, отличалось фанатизмом и религиозной нетерпимостью. В городе преобладало греческое население, и господство города над сельской округой было господством греков над сирийцами, которые составляли подавляющее большинство сельского населения; греки-землевладельцы противостояли сирийцам-крестьянам. Сирийцы, проживавшие в городе, составляли значительную часть его населения, но не имели гражданских прав и не пользовались влиянием в элите общества. В Антиохии не поощрялось изучение сирийского языка. Греческая муниципальная верхушка стремилась не допустить рост в городе сирийского населения и охотнее поддерживала дружеские контакты с иудейской общиной, которая жила обособленно и имела своих религиозных и политических вождей. Видимо, в середине II в. до н.э. они уже были уравнены в гражданских правах с греками и македонцами. О каких-либо столкновениях между иудеями и язычниками в Антиохии в период Маккавейских войн исследователям ничего не известно. В истории Антиохии эпохи династии Селевкидов исследователи особо выделяют период правления Антиоха IV Епифана, который получил прозвище «второго основателя» Антиохии за строительство Епифании, нового квартала, окончательно определившего внешний облик античного города. Этот квартал был также окружён стеной; Антиох IV выстроил здесь булевтерий, и, вероятно, он же построил новую агору в юго-восточной части города. При нём Евтихид, ученик Лисиппа, создал статую богини судьбы Тихе, покровительницы Антиохии, образ которой воспроизводился на монетах города и сохранился в многочисленных копиях: богиня восседает на скале, символизирующей гору Сильпий, увенчанная диадемой в виде стен и ворот города, у её ног юноша – символ Оронта. В Антиохии также находились крупные святилища бога войны Ареса, Диониса, Каллиопы и др., одним из главных покровителей города считался Зевс Касийский. Многочисленные храмы имели обширные кухни и трапезные залы, где обычно после религиозных церемоний на пирах подавались к столу жертвенные животные. Антиохия была украшена цветниками, бульварами и парками. В 9 км к юго-западу от города располагался живописный пригород Дафна, окружённый лавровыми и кипарисовыми рощами, с фонтанами и источниками.